Caracterização da microbiota presente na pele do anuro phyllomedusa distincta pela análise da biblioteca do gene do RNAr 16S

Abstract

A Phyllomedusa distincta é um anfíbio da ordem anura que ocorre Sudeste e Sul do Brasil. Representantes dessa ordem possuem glândulas serosas em toda a derme capazes de secretarem moléculas com atividade antimicrobiana. Glândulas granulares também estão presentes na derme e produzem toxinas, secretadas por células que as revestem. A ação dessas glândulas é uma resposta fisiológica do sistema de defesa contra patógenos. Além disso, esses animais possuem uma comunidade microbiana na derme, porém a relação dessa microbiota e anuro ainda não é conhecida. Considerando a hipótese de que essa microbiota tenha uma ação complementar ao sistema de defesa contra infecção por patógenos, o objetivo do presente trabalho foi à descrição da diversidade microbiana na derme de anuro da espécie P. distincta, por métodos moleculares. Em um estudo anterior foram coletados 15 indivíduos no Parque Estadual de Intervales – SP. Após a extração do DNA, três indivíduos foram selecionados para construção da biblioteca do gene do RNAr16S utilizando primers universais para o Domínio Bactéria. Os amplicons foram clonados em vetores pGEM-T Easy e inseridos por eletroporação em Escherichia coli. Para cada indivíduo foram sequenciados em média 100 clones. As sequências obtidas foram comparadas com o banco de dados RDP utilizando a ferramenta Classifier e uma árvore filogenética foi construída. As sequências analisadas revelaram uma predominância do filo Proteobacteria, especialmente da classe γ- Proteobacteria pertencente à família Enterobacteriaceae. Outras famílias como Pseudomonadaceae e Xanthomonataceae foram menos abundantes. Esse trabalho concorda com o previamente observado em experimentos de cultivo, nos quais as colônias mais abundantes obtidas da derme de P. distincta foram espécies da família Enterobacteriaceae. Essa família é encontrada em animais como parte da microbiota natural do intestino e em alguns casos como agentes patogênicos, porém, não é comum encontrar Enterobacteriaceae na pele de animais. É possível que o fato das espécies Phyllomedusinae diariamente espalhar com seus membros uma camada de material lipídico, secretado por glândulas lipídicas, sobre a pele para reduzir perda de água, esteja relacionada à criação de ambiente favorável para o crescimento assim como à dispersão de Enterobacteriaceae proveniente do intestino do próprio anuro.